Antikörper, auch Immunglobuline genannt, sind Y-förmige Schutzproteine, die von spezialisierten weißen Blutkörperchen, den sogenannten B-Lymphozyten, als Reaktion auf bestimmte Antigene gebildet werden. Ihre bemerkenswerte Spezifität und Affinität bilden die Grundlage der Immunabwehr und machen sie zu unverzichtbaren Werkzeugen in der biomedizinischen Forschung, Diagnostik und Therapieentwicklung (1).
Antikörper binden über komplementäre Bindungsstellen an bestimmte Regionen ihrer Zielmoleküle, die als Epitope bezeichnet werden. Diese selektive Bindung macht sie zu leistungsstarken Werkzeugen für den Nachweis, die Visualisierung, die Quantifizierung und die Manipulation biologischer Zielmoleküle
Bis heute gibt es rund 1,6 Millionen kommerziell erhältliche Antikörper, die etwa 96 % der menschlichen Proteine abdecken (2). Diese Antikörper unterstützen Anwendungen, die vom Proteinnachweis und der Bildgebung bis hin zu Immunoassays, Zellanalysen und In-vivo-Studien reichen. Die Auswahl des richtigen Antikörpers hängt jedoch nicht nur vom jeweiligen Zielmolekül ab, sondern auch von der Anwendung, der Probenart, der Nachweismethode und dem experimentellen Ziel.
Auf dieser Seite stellen wir die Antikörpertypen vor, die über die bewährten Lieferanten von 2BScientific erhältlich sind, und erläutern, wie man sie für verschiedene experimentelle Arbeitsabläufe auswählt.
Absolute Antibody bietet ein breites Sortiment an rekombinanten Primärantikörpern an , die alle anhand definierter Sequenzen hergestellt werden, um die Reproduzierbarkeit von Charge zu Charge sowie eine langfristige Verfügbarkeit zu gewährleisten. Viele Klone sind in verschiedenen Spezies und Isotypen erhältlich, wobei speziell entwickelte Formate wie Antikörperfragmente, Fc Silent™-Varianten und bispezifische Antikörper den unterschiedlichen experimentellen Anforderungen gerecht werden.
Abbildung 1. Durch die rekombinante Antikörperentwicklung können Antikörper in verschiedenen Spezies, Isotypen und Formaten hergestellt werden. Bild: Absolute Antibody.
Sekundärantikörper und Nachweis
Sekundärantikörper werden beim indirekten Nachweis verwendet und binden an Primärantikörper, die bereits an das Zielantigen gebunden sind. Im Gegensatz zum direkten Nachweis, bei dem ausschließlich ein markierter Primärantikörper zum Einsatz kommt, können Sekundärantikörper Fluorophore oder Enzyme tragen, um das Ziel zu visualisieren, das Signal zu verstärken und das Multiplexing zu unterstützen.
Bei der Auswahl eines für die Anwendung geeigneten Sekundärantikörpers sollten mehrere Faktoren berücksichtigt werden:
-
Wirts- und Probenart: Der Sekundärantikörper muss die Art erkennen, in der der Primärantikörper gewonnen wurde, und sollte selbst aus einer anderen Art stammen. Der Wirt des Primärantikörpers sollte sich zudem von der Probenart unterscheiden, um die Kreuzreaktivität zu verringern.
-
Antikörperklasse: Der Sekundärantikörper sollte zur Klasse oder Unterklasse des Primärantikörpers passen. Dies ist wichtig für monoklonale Antikörper, die zu einem einzigen Isotyp und einer einzigen Unterklasse gehören, während polyklonale Antikörper typischerweise mit Anti-IgG-Sekundärantikörpern nachgewiesen werden.
-
Konjugat: Das Konjugat sollte mit der Anwendung und der Nachweismethode kompatibel sein. Fluorophore werden häufig in der Bildgebung und Durchflusszytometrie verwendet, während Enzymmarkierungen weit verbreitet für Western Blot, ELISA und IHC eingesetzt werden. Für Multiplex-Analysen sollten Fluorophore sorgfältig ausgewählt werden, um spektrale Überlappungen zu minimieren.
Rockland Immunochemicals bietet ein umfangreiches Sortiment an Sekundärantikörpern für Anwendungen wie ELISA, Western Blot, IHC und Durchflusszytometrie. Das Portfolio umfasst zahlreiche Wirtsspezies, Antikörperklassen und Nachweismethoden, darunter fluoreszierende, kolorimetrische und chemilumineszente Konjugate sowie voradsorbierte Antikörper zur Verringerung der Kreuzreaktivität bei Multiplex-Experimenten.
Abbildung 2. Immunfluoreszenzfärbung der ELK1- und MZF1-Proteine unter Verwendung eines mit Rhodamin konjugierten sekundären Ziegen-Anti-Maus-IgG-Antikörpers. Bild: Rockland Immunochemicals.
Kontrollen und Blockierungsreagenzien
Neben der Antikörperselektion tragen geeignete Kontrollen und Blockierungsreagenzien dazu bei, Hintergrundsignale und unspezifische Bindungen zu identifizieren und zu minimieren, wodurch die Zuverlässigkeit der Versuchsergebnisse erhöht wird.
Isotyp-Kontrollen weisen wesentliche Merkmale des experimentellen Antikörpers auf, wie beispielsweise Wirtsspezies, Isotyp und Konjugat, besitzen jedoch keine Spezifität für das Zielmolekül von Interesse. Als Negativkontrollen eingesetzt, helfen sie bei der Bewertung des durch unspezifische Antikörperbindung verursachten Hintergrunds.
Blockierungsreagenzien reduzieren den Hintergrund, indem sie Bindungsstellen besetzen, an denen Antikörper andernfalls unspezifisch binden könnten. Die Wahl eines geeigneten Blockiermittels ist wichtig, da manche Reagenzien die Antikörperbindung oder den Nachweis stören können.
Abbildung 3. Blockierungsreagenzien besetzen unspezifische Bindungsstellen, um das Hintergrundsignal in antikörperbasierten Assays zu reduzieren. Bild: Rockland Immunochemicals.
Rockland Immunochemicals bietet Isotyp-Kontrollen und Blockierpuffer für ELISA, Western Blot und IHC an, die Forschern dabei helfen, unspezifische Bindungen zu bewerten und das Hintergrundsignal zu reduzieren.
Antikörper für die In-vivo-Forschung
In-vivo-Antikörper sind für den Einsatz in lebenden Organismen konzipiert, um unerwünschte biologische Reaktionen zu minimieren, die das Wohlergehen der Tiere beeinträchtigen und die Ergebnisse verfälschen könnten. Dies ermöglicht es Forschern, die Wirkungen von Antikörpern in einem physiologischen Kontext zu untersuchen, der den gesamten Organismus besser widerspiegelt.
Diese Antikörper werden in der Immunologie sowie in der Krebs- und Infektionsforschung eingesetzt, um Krankheitserreger zu neutralisieren, Immunreaktionen zu modulieren und Rezeptoren sowie Signalwege zu blockieren oder zu aktivieren. Bei der Auswahl eines In-vivo-Antikörpers sollten mehrere Faktoren berücksichtigt werden:
-
Reinheit: Verunreinigungen können unerwünschte biologische Reaktionen auslösen und die Ergebnisse verfälschen. Achten Sie auf hochreine Präparate, typischerweise ≥95 %.
-
Endotoxingehalte: Endotoxine können Immunreaktionen hervorrufen, Ergebnisse verfälschen und das Tierwohl beeinträchtigen. Präparate mit niedrigem Endotoxingehalt, typischerweise ≤1 EU/mg, werden im Allgemeinen bevorzugt.
-
Aggregation: Antikörperaggregate können die Aktivität verändern, die Immunogenität erhöhen und die Verträglichkeit beeinträchtigen. Die Aggregation lässt sich mithilfe von Techniken wie der Größenausschlusschromatographie (SEC) beurteilen.
Die InVivoPure+-Antikörpervon InVivo Biotech sind monoklonale Antikörper, die für In-vivo-Forschungsanwendungen entwickelt wurden. Sie werden unter serumfreien Bedingungen hergestellt, weisen eine Reinheit von ≥95 % und Endotoxingehalte von ≤1 EU/mg auf und tragen so dazu bei, Verunreinigungen zu minimieren, die In-vivo-Experimente beeinträchtigen könnten.
Abbildung 4. InVivoPure+ mStab1-1.26, ein monoklonaler Antikörper in In-vivo-Qualität, der gegen Stabilin-1 der Maus gerichtet ist. Bild: InVivo Biotech.
Entdecken Sie das gesamte Antikörpersortiment von 2BScientific von spezialisierten Anbietern für den Proteennachweis, die Bildgebung, Immunoassays, die Zellanalyse und die In-vivo-Forschung. Für alternative Targeting-Ansätze und die Erforschung therapeutischer Antikörper stehen zudem spezialisiertere Formate zur Verfügung, darunter Nanokörper und Biosimilars für die Forschung.
Ausgewählter Lieferant
Absolute Antibody ist auf die Sequenzierung, das Engineering und die rekombinante Expression von Antikörpern spezialisiert und verfügt über einen Katalog mit mehr als 15.000 gentechnisch veränderten rekombinanten Antikörpern. Die sequenzdefinierte Produktionsplattform des Unternehmens gewährleistet eine reproduzierbare Herstellung und eine langfristige Antikörperversorgung und ermöglicht gleichzeitig den Wechsel zwischen verschiedenen Spezies und Isotypen, die Herstellung von Antikörperfragmenten, bispezifische Formate sowie Fc Silent™-Varianten. Mit Erfahrung in der Herstellung von mehr als 180 Antikörperformaten bietet Absolute Antibody zudem spezialisierte Produktreihen wie VivopureX™ an, bei der etablierte Antikörperklone mittels rekombinanter Technik für die In-vivo-Forschung angepasst werden.