Protokolle zur Immunpräzipitation (IP) und zum Western Blot (WB) liefern hochspezifische Ergebnisse, leiden jedoch häufig unter schlechter oder unspezifischer Bindung, hohem Hintergrund und Interferenzen durch schwere bzw. leichte Ketten.
Die TrueBlot®-Produktreihe von Rockland umfasst sowohl TrueBlot®-IP-Beads als auch monoklonale TrueBlot®-Sekundärantikörper, die diese häufigen experimentellen Probleme durch erhöhte Spezifität, geringen Hintergrund und verbesserte Genauigkeit beheben und so IP-Western-Blots in Publikationsqualität ohne Störungen durch kontaminierendes IgG ermöglichen.
Die TrueBlot®-Produktlinie eignet sich ideal für die Untersuchung von Protein-Protein-Wechselwirkungen, posttranslationalen Modifikationen (Phosphorylierung und Acetylierung), schwach exprimierten Proteinen sowie immunpräzipitierten Proteinen mit Molekulargewichten, die denen der schweren und leichten Ketten ähneln.
TrueBlot®-Sekundärantikörper erkennen Primärantikörper ausschließlich in ihrem nativen (nicht reduzierten) Zustand, wodurch Störungen durch Banden der schweren und leichten Ketten vermieden werden und präzise Western Blots in Publikationsqualität von immunpräzipitierten Proben erzielt werden. Kombinieren Sie TrueBlot®-Antikörper mit den außergewöhnlichen Aufreinigungseigenschaften der TrueBlot® IP-Beads, um die üblichen Probleme beim IP-Western-Blot zu beseitigen.
Fluoreszierender TrueBlot® Anti-Kaninchen-Ig-Fluorescein-Antikörper (Kat.-Nr. 18-0216-32)
Immunfluoreszenzmikroskopie von BCL3 in Caco-2-Zellen unter Verwendung von FITC-konjugiertem Fluorescent TrueBlot®-Anti-Kaninchen-Ig zum Nachweis.
Caco-2-Zellen wurden mit 4 % PFA fixiert, 1 Stunde lang blockiert (5 % Mausseren/0,3 % Triton X-100 in 1X PBS) und anschließend über Nacht bei 4 °C mit 15 µg/ml des primären Anti-BCL3-Antikörpers (Kat.-Nr. 600-401-GU4) über Nacht bei 4 °C inkubiert. Nach dreimaligem Waschen in 1× PBS (jeweils 5 Minuten) wurden 5 µg/ml FITC-konjugiertes fluoreszierendes TrueBlot®-Anti-Kaninchen-IgG zugegeben und 1 Stunde bei Raumtemperatur inkubiert. Die Zellkerne wurden mit dem im Einbettmedium enthaltenen DAPI gegengefärbt. Die vorhergesagte Hauptlokalisierung ist das Nukleoplasma. Eine zusätzliche Lokalisierung in einigen Zelltypen umfasst Vesikel und den Midbody. (a) BCL3 (b) DAPI (c) DAPI/BCL3-Fusion (d) nur Sekundärantikörper. Aufnahme bei 40-facher Vergrößerung.
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