Warum sollte man CFS anderen Optionen zur Proteinexpression vorziehen?
Die Durchführung der Proteinexpression ohne lebende Wirtszelle bietet zahlreiche Vorteile, die im Folgenden aufgeführt sind.
Proteinexpressionsraten/Löslichkeit
Das CellFree-System weist höhere Expressionsraten und eine höhere Löslichkeit auf als andere Proteinexpressionssysteme. Der Einsatz der Produkte und Dienstleistungen von CellFree Sciences kann Probleme mit Proteinen lösen, die mit anderen Expressionssystemen nicht exprimiert werden konnten oder nach der Expression unlöslich wurden.
In den meisten Fällen lassen sich die höchsten Ausbeuten mit dem zellfreien Weizenkeim-Expressionssystem erzielen.
Reproduzierbarkeit/Skalierbarkeit
Die Menge des exprimierten Proteins bleibt mehr oder weniger konstant, unabhängig davon, wie oft die Expression durchgeführt wird, da das System eine hohe Reproduzierbarkeit aufweist.
Sobald die Ausbeute des Zielproteins bestätigt ist, lassen sich weitere Synthesen und Kostenkalkulationen problemlos durchführen, was eine effiziente Vorausplanung ermöglicht.
Einfache Bedienung
Proteine lassen sich gewinnen, wobei lediglich eine Pipette zum Dosieren der Reagenzien und ein Inkubator zur Temperaturregelung benötigt werden.
Keine Codon-Optimierung erforderlich
Ein zellfreies Proteinexpressionssystem auf Weizenkeim-Basis reagiert weniger empfindlich auf Codon-Bias, sodass keine Codon-Optimierung erforderlich ist (es sind keine bevorzugten Codon-Änderungen für den Wirt notwendig) und die Gene der ursprünglichen Spezies unverändert verwendet werden können.
Es kommt zu keiner Verringerung der exprimierten Mengen, selbst bei mRNA mit einer einzigartigen Sequenz.
Selektivität der Synthesebedingungen
Die für die Proteinexpression erforderlichen Bedingungen sind flexibel, da die RNase-Aktivität des Weizenkeimextrakts äußerst gering ist und die Reaktionsbedingungen für die Translationsphase je nach Zweck frei gewählt werden können.
Variablen wie Temperatur, Zeit und Reaktivitäten können je nach Bedarf angepasst werden.
Kann international genutzt werden
Es gibt keine Beschränkungen für den internationalen Bezug von Proteinen aus diesen Systemen, da sie nicht unter das Gesetz zur Erhaltung und nachhaltigen Nutzung der biologischen Vielfalt durch Vorschriften zur Verwendung lebender veränderter Organismen fallen.
Dies ermöglicht es internationalen Verbundprojekten, das CellFree-System ohne lästige Ausfuhrbeschränkungen zu nutzen.
Zellfreies Proteinexpressionssystem auf Weizenkeim-Basis
Die Kraft des Weizens als Motor der Wissenschaft
CellFree Sciences nutzt sein eigenes zellfreies Proteinexpressionssystem auf Weizenkeim-Basis, um den Proteinbedarf in den Biowissenschaften und für industrielle Anwendungen zu decken. Durch die Proteinsynthese außerhalb der Zelle in einem In-vitro-System können wir die Proteinproduktion von anderen Prozessen trennen, die für den Erhalt einer Zelle erforderlich sind.
Merkmale
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Vom CFS entwickelte Hochleistungs-Weizenkeimextrakte für überragende Proteinausbeuten
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Spezielle Extrakte für die Expression von GST-markierten und His-markierten Proteinen (G- und H-Versionen)
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Spezielle aminosaurefreie Reagenzien zur Proteinmarkierung (WEPRO®8240-Serie)
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Beispiele zeigen die Expression von DHFR unter Verwendung von 6-ml-Doppelschichtreaktionen auf dem vollautomatischen Protemist DTII-Proteinsynthesizer von CFS.
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Vorgereinigte Weizenkeimextrakte der G- oder H-Versionen ermöglichen eine höhere Proteinreinheit nach einer einstufigen Proteinreinigung.
Unterstützte Reaktionsformate
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ONE-Kit: Gekoppeltes Transkriptions-Translations-System für schnelle Proteinexpressionsexperimente
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Protein-Forschungskits: Vorgemischte Transkriptions- und Translationsreagenzien zur Durchführung von Doppelschichtreaktionen
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Core-Kits: Einzelne Reagenzien zur Durchführung von Doppelschichtreaktionen in unterschiedlichen Maßstäben
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Dialyse-Kits: Einzelne Reagenzien zur Durchführung von dialysegesteuerten Expressionsreaktionen
Spezielle Anwendungen
- FLEXIQuant-Standards: Modifizierte Reaktionsbedingungen ermöglichen eine Markierungseffizienz von bis zu 99 % bei der Einbindung von [13C, 15N]-L-Lys und [13C, 15N]-L-Arg von Cambridge Isotope Laboratories zur Herstellung von Standards für die quantitative Protein-MS, Untersuchungen zu PTMs und die Proteomik
- NMR-Proben: Expressionskits mit isotopenmarkierten Aminosäuren von Cambridge Isotope Laboratories
- ProteoLiposome BD-Kit: Expression von Membranproteinen in Gegenwart von zugesetzten Liposomen
Aktuelle Zitate und Veröffentlichungen
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Aktuelle Zitate und Veröffentlichungen
Entwicklung eines zellfreien Proteinsynthesesystems für den praktischen Einsatz.
Endo Y.
Proc Jpn Acad Ser B Phys Biol Sci. 2021;97(5):261–276. doi: 10.2183/pjab.97.015. PMID: 33980755; PMCID: PMC8141837.
Tau-PTM-Profile identifizieren Patientenheterogenität und Stadien der Alzheimer-Krankheit.
Wesseling H. et al.
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Probenvorbereitung von Proteinen für Festkörper-NMR-Untersuchungen.
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