Validierte IHC-Protokolle
LSBio hat zwei Produktlinien von für FFPE-Gewebe validierten IHC-Antikörpern entwickelt und stellt die entsprechenden Protokolle zur Verfügung, damit diese Methoden einfach und zuverlässig reproduziert werden können.
LSBio erleichtert die Auswahl hochwertiger Antikörper für Ihre Forschung durch seine umfangreichen, validierten Antikörperportfolios.
Mehr als 20.000 Antikörper wurden an über 20 verschiedenen normalen menschlichen Gewebetypen sowie – je nach Antikörper – an weiteren relevanten Gewebearten getestet. Für die Aufnahme in die IHC-plus™-Produktlinie müssen Antikörper eine hohe Übereinstimmung mit publizierten wissenschaftlichen Daten aufweisen, eine hohe Affinität besitzen, nur minimale Färbeartefakte zeigen und ein ausgezeichnetes Signal-Rausch-Verhältnis liefern.
Die PathPlus™-Produktlinie bietet darüber hinaus eine erstklassige Färbequalität und erfüllt sämtliche Anforderungen der IHC-plus™-Reihe.
2BScientific bietet zudem eigene IHC-Unterstützung und Beratung an. Gerne besprechen wir gemeinsam Ihre Methode und helfen Ihnen dabei, diese optimal an Ihre Anforderungen anzupassen.
Gewebepräparation
- Formalinfixierung und Einbettung in Paraffin
Gewebeschnitt
- Anfertigung von 4-µm-Gewebeschnitten und Aufbringen auf vorgereinigte, positiv geladene Objektträger.
- Trocknung im Gewebeofen für 45 Minuten bei 60 °C.
Entparaffinierung und Rehydrierung
- Objektträger in drei Xylolbädern* jeweils 5 Minuten bei Raumtemperatur waschen.
- Objektträger in drei Bädern mit 100 % Ethanol jeweils 3 Minuten bei Raumtemperatur waschen.
- Objektträger in zwei Bädern mit 95 % Ethanol jeweils 3 Minuten bei Raumtemperatur waschen.
- Objektträger in einem Bad mit 80 % Ethanol für 3 Minuten bei Raumtemperatur waschen.
- Anschließend 5 Minuten unter leicht fließendem destilliertem Wasser spülen.
Antigen-Retrieval
- Objektträger für 20 Minuten bei 99–100 °C in 0,01 M Natriumcitratpuffer (pH 6,0) bedampfen.
- Von der Wärmequelle entfernen und weitere 20 Minuten bei Raumtemperatur im Puffer abkühlen lassen.
- Anschließend 1 Minute in 1× TBS mit Tween (TBST) spülen.
Immunfärbung
- Während des gesamten Färbeprozesses darf das Gewebe nicht austrocknen.
- Universellen Proteinblock auftragen und 20 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.
- Proteinblock abgießen und den verdünnten Primärantikörper auftragen; 45 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.
- Objektträger 1 Minute in 1× TBST spülen.
- Biotinylierten Sekundärantikörper (spezifisch für die Wirtsart des Primärantikörpers) auftragen; 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.
- Objektträger 1 Minute in 1× TBST spülen.
- Alkalische-Phosphatase-Streptavidin (AK-5000) auftragen; 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.
- Objektträger 1 Minute in 1× TBST spülen.
- Alkalische-Phosphatase-Chromogensubstrat (SK-5100) auftragen; 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.
- Objektträger 1 Minute in destilliertem Wasser waschen.
Dehydrierung
- Diese Methode sollte nur verwendet werden, wenn das verwendete Chromogensubstrat alkohollösungsbeständig ist.
- Objektträger in zwei Bädern mit 80 % Ethanol jeweils 1 Minute bei Raumtemperatur waschen.
- Objektträger in zwei Bädern mit 95 % Ethanol jeweils 1 Minute bei Raumtemperatur waschen.
- Objektträger in drei Bädern mit 100 % Ethanol jeweils 1 Minute bei Raumtemperatur waschen.
- Objektträger in drei Xylolbädern jeweils 1 Minute bei Raumtemperatur waschen.
- Permanentes, nicht-wässriges Eindeckmedium auftragen.
- Deckglas aufbringen.
LSBio und Vector Laboratories
LSBio vertreibt die Reagenzien von Vector Laboratories in den USA und ermöglicht Forschenden damit den Bezug von Antikörpern und Nachweissystemen aus einer Hand. 2BScientific freut sich, die Reagenzien von Vector Laboratories exklusiv im Vereinigten Königreich anbieten zu können.