FIX & PERM® Cell Permeabilization Kit

Die intrazelluläre Färbung von Protein-Biomarkern mit Antikörpern in der Durchflusszytometrie hat eine Vielzahl neuer Möglichkeiten für die phänotypische und funktionelle Charakterisierung von Zellen in Forschung und klinischer Diagnostik eröffnet.

Tatsächlich erfordert die eindeutige phänotypische Identifizierung bestimmter Zelltypen oft die Markierung sowohl von Zelloberflächen- als auch intrazellulären Markern. Darüber hinaus kann die zytoplasmatische Lokalisation typischer Membranmoleküle ein besonders verlässlicher Abstammungsmarker sein, wie zytoplasmatisches CD3 und CD22 bei undifferenzierter Leukämie.

In solchen Fällen und für viele weitere zellbiologische und funktionelle Untersuchungen ist die intrazelluläre Immunfärbung unerlässlich. Für diesen Zweck bietet Nordic-MUbio ein branchenführendes Zellfixierungs- und Permeabilisierungskit – FIX&PERM® – das zahlreiche Vorteile gegenüber anderen Methoden zur intrazellulären Färbung von Zellen in der Durchflusszytometrie bietet.

FIX&PERM®

• Fixiert Zellen schonend und bewahrt ihre Streuungseigenschaften in der Durchflusszytometrie

• Ermöglicht die gleichzeitige Charakterisierung von intrazellulären und Zelloberflächenmarkern

• Schnelle Methode – der gesamte Ablauf dauert weniger als eine Stunde und ist direkt zur Analyse bereit oder kann bis zu 24 Stunden gelagert werden

• Strenge QC-Verfahren – die Qualität jeder Charge wird anhand definierter Blutproben überprüft und durch den Vergleich der Streuungseigenschaften der erhaltenen Leukozytenpopulationen sichergestellt, um konsistente und verlässliche Ergebnisse Charge für Charge zu gewährleisten

• Eine Auswahl an intrazellulären Antikörpern mit optimierten Protokollen für die Verwendung mit FIX&PERM®

FIX&PERM® ist ein einfaches Verfahren, das zwei Reagenzien verwendet. Reagenz A fixiert Zellen schonend, während Reagenz B sie permeabilisiert. Die speziellen Formulierungen reduzieren Hintergrundsignale und ermöglichen die gleichzeitige Zugabe des Permeabilisierungsmediums und fluorochrom-markierter Antikörper, sodass intrazelluläre Strukturen wie zytoplasmatische oder nukleäre Enzyme, Onkoproteine, Zytokine, Immunglobuline usw. gefärbt werden können.

Verfahren

Für jede zu analysierende Probe 50 µl Vollblut, Knochenmark oder eine Suspension mononukleärer Zellen in ein 5-ml-Röhrchen geben

• 100 µl Reagenz A (Fixierungsmedium, bei Raumtemperatur gelagert und verwendet) hinzufügen
• 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren
• 5 ml phosphatgepufferte Salzlösung (PBS) hinzufügen und die Zellen 5 Minuten bei 300 g zentrifugieren
• Überstand entfernen und den Zellpellet mit 100 µl Reagenz B (Permeabilisierungsmedium) und 20 µl des entsprechenden monoklonalen Antikörper-Konjugats versetzen
• 1–2 Sekunden bei niedriger Geschwindigkeit vortizieren
• 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren
• Zellen wie oben beschrieben mit phosphatgepufferter Salzlösung waschen
• Überstand entfernen und Zellen entweder in Hüllflüssigkeit für die sofortige Analyse resuspendieren oder in 0,5 ml 1,0 % Formaldehyd resuspendieren und bei 2–8 °C im Dunkeln lagern
• Fixierte Zellen innerhalb von 24 Stunden analysieren

Produkte, die für die Verwendung mit FIX&PERM® optimiert sind

Die Mehrheit der verfügbaren monoklonalen Antikörper-Konjugate kann mit FIX&PERM® verwendet werden. In einigen Fällen muss jedoch der Fixierungsschritt optimiert werden.

Nordic-MUbio bietet eine Auswahl an maus-anti-human (PE/FITC) monoklonalen Antikörpern an, die speziell für die Verwendung mit FIX&PERM® optimiert sind.